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细胞体外培养实验的成功要从用水的选择开始!

  • 发布时间:2025-06-23 19:07:25  来源:bob电竞

  乐枫RephiLe纯水器、超纯水器、纯水机、超纯水机大流量Genie R纯水系统

  微生物,培养环境中所掺杂的物质也有一定可能会影响细胞的生长。水是细胞赖以生存的主要环境,营养的东西和代谢产物都必须溶解在水中,才能为细胞吸收和排泄。对于体外培养的细胞来说,水是细胞培养液和试剂中简单而重要的组分。所以,

  细胞培养对水的质量发展要求较高,培养用水中如果含有一些杂质,即使含量极微,有时也会影响细胞的存活和生长,甚至导致细胞死亡。水中的杂质对水质有不同影响:

  1.离子——平衡渗透压;一些重金属 (Cadmium)对细胞毒害大,即便剂量很低 (0.1 ppb);2.微生物——污染,改变微环境如pH,影响增殖,死后释放内毒素等;

  衡量实验室用水导电性能的指标,单位为MΩ•cm,随着水内无机离子的减少电阻数值逐渐变大。

  水中碳的浓度,反映水中可氧化的有机物的含量,可间接反映出水中细菌和内毒素含量的高低。单位为ug/L或ppb。

  参考国际标准化组织的实验室纯水规范ISO3696,美国CLSI和ASTM D1193的试剂纯水规范,我国GBT6682和GBT 30301的试验用水指导,《实验细胞资源的描述标准与管理规范》用水指导,结合多年的实验操作经验,总结出细胞培养用水对水质的要求。

  细胞培养过程中,各种培养液和试剂的配制用水均需要经过严格的纯化处理,不含离子和其他的杂质,即使是储存试剂的玻璃器皿,在自来水冲洗过后也应用超纯水漂洗三次以上。目前,市场上供应的纯水装置种类较多,比如自来水进水同时制备二级纯水和超纯水的

  ,可以由自来水进水通过预处理柱P Pack、反渗透柱RO Pack及EDI(连续电流电去离子)模块等纯化后达到二级纯水,储存于水箱中以满足日常的清洗应用;水箱中的水再经过U Pack超纯化柱去离子,紫外灯照射杀菌并降低有机物含量,最后经终端滤器RephiBio过滤,以获得无菌、无热源、无核酸酶的超纯水。

  纯水的储存对保持纯水的质量是至关重要的,由于周围环境和空气中的二氧化碳更容易使水污染改变其pH,所以储存水的容器要尽量密封,避免和外界过多接触,抑制微生物生长。如Genie纯水设备能提供的

  纯水水箱带有紫外消毒模块和去除二氧化碳的过滤器,能够尽量的保证水箱内的纯水水质。

  可用于去除纯水中特定类型的污染物,满足多种实验的应用需求。对于细胞体外培养可以选用

  RephiBio Filter 纯水终端过滤器,安装在乐枫超纯水设备系统的出水口,可有效去除水中的热原(内毒素)、核酸酶、细菌等杂质,制备符合细胞培养用水要求的超纯水(无热原、无DNase、无RNase、无菌)。

  即取即用,因此取水的远程监控和水质实时监测就显得很重要。目前已有厂家能够给大家提供与手柄通过无线连接的实验室纯水机(如上面提到的Genie),将水机和取水手柄分别放在洁净间的内外,通过无线控制取水手柄达到超纯水的取用和实时检测水的电阻率和TOC数值,很适合无菌环境下的操作,最好能够降低污染。

  1.超纯水应当注意使用时间,应该“即取即用”。防止超纯水吸收外界的杂质导致水质下降。

  2.在合适的环境使用超纯水。环境中的VOC(挥发性有机物),细菌等都会影响细胞培养。

  4.配制离散细胞用的消化液和细胞洗涤液时,宜采用钙、镁离子含量低的缓冲液,缓冲液用水能选用装配乐枫低镁型纯化柱的纯水机,避免钙、镁离子促使细胞凝聚作用的产生。

  细胞培养(cell culture)是指在体外模拟体内环境(无菌、适宜温度、酸碱度和一定营养条件等),使之生存、生长、繁殖并维持主要结构和功能的一种方法。细胞培养的整一个流程中实验用水

  2.原代培养:1640、DMEM等培养基用水,明胶等支持物的配制,添加药物、检测试剂的配制;

  细胞体外培养的细胞类型大体上分为动物细胞培养、植物细胞培养和微生物培养,其中极难的是动物细胞的培养。

  除了需要无菌、温度、气体、渗透压、pH等门槛,它还需要血清、支持物等特殊物质,其中原代细胞的培养是很难的。

  微生物培养多为单细胞生物,微生物人工培养的条件比动植物细胞简单得多,蛋白胨、麦芽汁、酵母膏等培养基即可满足微生物的营养要求,其中厌氧微生物培养比好氧微生物复杂,需要维持CO2等非氧惰性气体的浓度。

  ,那么配制培养基或试剂用水的选择大有讲究,不同细胞体外培养用水的指标如下:细胞体外培养用水选择

  纯水或超纯水进行多效蒸馏制成,严控热源、无菌、内毒素、pH、渗透压等指标

  采用0.22μm的过滤膜,可有效去除水中的热原(内毒素)、核酸酶、细菌等杂质。

  采用0.22μm带正电荷的双层尼龙66过滤膜,可制备符合生物领域应用要求的超纯水(无热原、无DNase、无RNase、无菌),纯水中内毒素含量低于0.001 Eu/mL,核酸酶的含量低于可检测范围,微生物的含量低于0.1 cfu/mL,能够完全满足动物细胞和植物细胞的需求。

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